Normalna spermatogeneza u mężczyzny ze zmutowanym hormonem luteinizującym czesc 4

Ostatnie testy wykazały niewykrywalny poziom hormonu luteinizującego i niski poziom estradiolu oraz wysoki poziom hormonów folikulotropowych (Tabela 1). Brat, Temat IV-2 (ur. W 1967 r.), Był ojcem dwojga dzieci, a inna siostra, Temat IV-4 (ur. W 1975 r.), Miała normalny poziom hormonalny (Tabela 1). Jeszcze inna siostra, Temat IV-1 (ur. W 1957 r.), Była matką dwojga dzieci; ona i jego drugi brat, Temat IV-6 (ur. w 1977 r.), nie mogli studiować. Metody
Sekwencjonowanie DNA
Przeprowadziliśmy sekwencjonowanie trzech egzonów LHB, jak opisano w dodatkowym dodatku.
Analiza immunohistochemiczna
Ocenę immunohistochemiczną przeprowadzono przy użyciu komercyjnego zestawu (system LSAB + z 3-amino-9-etylokarbazolem, Dako), jak opisano powyżej.15
Analiza funkcjonalna zmutowanego hormonu luteinizującego beta
Sekwencje kodujące ludzki LHA (kodujący podjednostkę alfa hormonu luteinizującego) i LHB wstawiono do wektora pSG5 (Stratagene). Następnie wprowadziliśmy delecję przenoszoną przez proband do LHB w celu wytworzenia zmutowanego konstruktu beta hormonu luteinizującego; wprowadziliśmy również epitop V5 do C-końca alfa podjednostki hormonu luteinizującego, aby uzyskać konstrukt .-V5. Analizy Western blot wykonywano przy użyciu przeciwciała przeciw ludzkiej gonadotropinie . (ab14301, Abcam), które reaguje krzyżowo z podjednostką beta ludzkiego hormonu luteinizującego; pobrane próbki stanowiły lizaty komórkowe i zatężoną pożywkę komórek ludzkich embrionalnych komórek nerki (HEK) 293T transfekowanych za pomocą odczynnika do transfekcji (SuperFect, Qiagen). Do analizy koimmunoprecypitacji lizaty komórkowe z transfekowanych komórek COS-7 (pochodzących od fibroblastów z nerek afrykańskich zielonych małp) inkubowano z przeciwciałem anty-V5 (Invitrogen), a immunoprecypitaty analizowano za pomocą Western blotting. Aktywność rekombinowanego, wydzielanego zmutowanego hormonu luteinizującego w stosunku do hormonu luteinizującego typu dzikiego określono przez oszacowanie akumulacji cyklicznego AMP w komórkach HEK 293T przejściowo wyrażających ludzki receptor hormonu luteinizującego. Poziom hormonu luteinizującego typu dzikiego w pożywce hodowlanej oznaczano za pomocą testu immunofluorometrycznego (test immunoenzymatyczny związany z LHsp, Biosource). Szczegóły podano w Dodatkowym dodatku.
Wyniki
Analiza sekwencji LHB z probandu (ryc. S1A w dodatkowym dodatku) ujawniła homozygotyczną delecję dziewięcio-zasadową w eksonie 2, co do której przewidziano, że spowoduje delecję aminokwasów 10 do 12 (histydyna-prololina-izoleucyna) w zmutowanej luteinizmie. hormon beta (rysunek 1B). Prolina i reszty hydrofobowe (izoleucyna lub walina) są wysoce konserwatywne w genach LHB ssaków. Zainfekowana siostra, Podmiot IV-5, była również homozygotyczna pod względem usuwania; matka (podmiot III-2) i bezobjawowe rodzeństwo (podmioty IV-2 i IV-4) były heterozygotami do delecji (ryc. S1B w dodatkowym dodatku).
Figura 3. Figura 3. Wytwarzanie i heterodimeryzacja w mutancie i luteinizującym hormonie (LH) Beta i bioaktywności zmutowanej i LH typu dzikiego. Panel A pokazuje niskie wewnątrzkomórkowe i wydzielane poziomy zmutowanej podjednostki beta LH w transfekowanych komórkach
[przypisy: wdrożenia magento, olej kokosowy na włosy, olejek moringa ]

Powiązane tematy z artykułem: olej kokosowy na włosy olejek moringa wdrożenia magento